Endothelialitis легочных сосудов, тромбоз, ангиогенез и в Covid-19


Полная Экспертиза

Средней (±ѕе) вес легких у пациентов с подтвержденной пневмонией гриппа, был достоверно выше, чем у пациентов с доказанной Covid-19 (2404±560 г и 1681±49 г; р=0,04). Средний вес неинфицированного контрольного легких (1045±91 г) был достоверно ниже, чем в группе гриппа (Р=0,003) и Covid-19 группы (Р<0,001).

Воспаление Angiocentric

Рис. 1. Рис. 1. Лимфоцитарного воспаления в легких у больного, который умер от Covid-19.

Валовый внешний вид легкого у пациента, который умер от заболевания коронавирусом 2019 (Covid-19) показаны в панели (масштабная линейка соответствует 1 см). Проведении патогистологического исследования, показано на панели Б, выявили интерстициальный и периваскулярный лимфоцитарный преимущественно пневмонии с мультифокальным endothelialitis (гематоксилин–эозин; масштабная линейка соответствует 200 мкм).

Всем легких образцов из Covid-19 группа диффузного альвеолярного повреждения с некрозом альвеолярных выстилающих клеток, pneumocyte 2 типа гиперплазии, и линейная внутри альвеолярные отложение фибрина (Рис. 1). В четырех из семи случаев изменения были очаговыми, только с умеренный интерстициальный отек. В остальных трех случаях была однородной отложений фибрина и отмечен интерстициальный отек с ранним внутри альвеолярные организации. Образцы в группе гриппа была витиеватой диффузного альвеолярного повреждения с массивной интерстициальным отеком и обширными фибрина осаждения во всех случаях. Кроме того, три образца в группе гриппа фокусное организации и воспаление резорбтивной (рис. С2). Эти изменения были отражены в гораздо больший вес легких у больных гриппом.

Иммуногистохимический анализ ангиотензин-превращающего фермента 2 (ACE2 и) выражении, определяемый как среднее (±SD) в относительных отсчетов ACE2 и-позитивных клеток в поле зрения, в неинфицированного контрольного легких показала скудные выражение ACE2 и в альвеолярных эпителиальных клеток (0.053±0,03) и капиллярных эндотелиальных клеток (0.066±0.03). В легких у пациентов с Covid-19 и легких у больных гриппом, относительный пунктам ACE2 и-позитивных клеток в поле зрения были 0,25±0,14 и 0,35±0,15 соответственно, для альвеолярных эпителиальных клеток и 0,49±0,28 и 0.55±0.11, соответственно, эндотелиальных клетках. Кроме того, ACE2 и-положительные лимфоциты не были замечены в периваскулярной ткани и в альвеолы контроль легких, но присутствовали в легких в Covid-19 группы и гриппа группы (относительный подсчет 0.22±0.18 и 0.15±0.09, соответственно). (Подробности подсчета представлены в таблице С2.)

В легких у пациентов с Covid-19 и больных гриппом, похожие среднее (±SD), что цифры числа CD3-положительных Т-клеток были обнаружены в 200 мкм радиуса прекапиллярных и посткапиллярных сосудов стенки в 20 полях обследование одного пациента (26.2±13.1 для Covid-19 и 14,8±10.8 гриппа). С такой же размер поля используются для обследования на CD4-позитивные Т-клетки были более многочисленными в легких у пациентов с Covid-19, чем в легких от больных гриппом (13.6±6.0 и 5.8±2.5, Р=0,04), тогда как СD8-позитивных Т-клеток были менее многочисленными (5.3±4,3 против 11.6±4.9, Р=0,008). Нейтрофильных гранулоцитов (CD15-позитивных) были значительно менее многочисленные, прилегающие к альвеолярной эпителиальной выстилки в Covid-19 группы, чем в группе гриппа (0.4±0.5 против 4,8±5.2, Р=0,002).

В мультиплексного анализа, связанные с воспалением экспрессии генов исследовав 249 гены на панели воспаление nCounter (технологии NanoString) выявлены сходства и различия между образцами в Covid-19 группы и в группе гриппа. В общей сложности 79, связанные с воспалением генов дифференциально регулируется только в образцах от пациентов с Covid-19, в то время как 2 гены дифференциально регулируется только в образцах от больных гриппом; общий паттерн экспрессии встретился для 7 генов (рис. С1).

Тромбоз и микроангиопатии

Рис. 2. Рис. 2. Микротромбов в межальвеолярных Септах легкого у пациента, который умер от Covid-19.

В межальвеолярных перегородки данного пациента (Пациент 4 в таблице турбонагнетатель s1a в дополнительном приложении) показывает немного расширил альвеолярных стенок с несколькими фибринозный микротромбов (наконечники) в альвеолярных капиллярах. Сгустки эритроцитов и широкая сеть фибрина можно увидеть внутри альвеолярные пространства (гематоксилин–эозин; масштабная линейка соответствует 50 мкм).

Легочных сосудов легких в Covid-19 группы и гриппа группы была проанализирована гематоксилином–эозином, покрытия трехцветный и иммуногистохимического окрашивания (как описано в разделе методы в дополнительном приложении). Анализ прекапиллярных сосудов показал, что в четырех из семи легких у пациентов с Covid-19 и четыре из семи легких от пациентов с гриппом, тромбы были неизменно присутствуют в легочных артериях с диаметром от 1 мм до 2 мм, без полной обструкции просвета (фиг. С3 и С5). Фибрин тромбов в альвеолярных капиллярах можно увидеть во всех легких у пациентов обеих групп (Рис. 2). Альвеолярно-капиллярных микротромбов были в 9 раз выше у пациентов с Covid-19, как и у пациентов с гриппом (среднее значение [стандартное отклонение] количество различных тромбов на квадратный сантиметр просвета сосудов уголок, 159±73 и 16±16, соответственно; Р=0,002). Внутрисосудистых тромбов в посткапиллярных венулах менее 1 мм в диаметре были замечены и в меньшем количестве в легких у пациентов с Covid-19, чем у тех, у пациентов с гриппом (12±14 против 35±16, Р=0,02). Два легких в Covid-19 группа приняла участие во всех сегментах сосудистого русла, по сравнению с четырьмя легких на фоне гриппа группы; в трех из легких в Covid-19 группы и три легких в гриппа группы в сочетании капиллярные и венозные тромбы были найдены без артериальных тромбов.

Результаты гистологического были поддержаны трехмерной микрокомпьютерная томография легочных образцов: легких от пациентов с Covid-19 и от больных гриппом показал почти полной окклюзии прекапиллярных и посткапиллярных сосудов.

Ангиогенез

Рис. 3. Рис. 3. Микрососудистых изменений в легких у больных, умерших от Covid-19.

Панели A и B показывают электронного микроскопа микрососудистых коррозии отливок из тонкостенной альвеолярного сплетения здорового легкого (панель а) и существенные архитектурные искажения видны в легких ранения в результате Covid-19 (Группа Б). Потеря четко видна иерархия судов в альвеолярного сплетения является результатом новых кровеносных сосудов формирование intussusceptive ангиогенеза. Панель c показывает intussusceptive столп локализации (стрелки) при большем увеличении. Группа D представляет собой микрорисунок электрона передачи, показаны ультраструктурные особенности поражения эндотелиальных клеток и торс-ков-2 видны внутри клеточной мембраны (стрелки) (масштабная линейка соответствует 5 мкм). Радиоуправляемый обозначает красную клетку.

Мы рассмотрели архитектуру микрососудов легких у пациентов с Covid-19, легкие от больных гриппом и неинфицированного контрольного легких с использованием сканирующей электронной микроскопии и микрососудистых коррозии отливок. Легкие в Covid-19 группа была искажена кровоснабжения структурно деформированных капилляров (Рис. 3). Вытянутые капилляры в легких у пациентов с Covid-19 показал резкие изменения в Калибр и наличие intussusceptive столбов в капилляры (рис. 3C). Трансмиссионной электронной микроскопии Covid-19 эндотелия показали ультраструктурные повреждения эндотелия, а также наличие внутриклеточных торс-ков-2 (Рис. 3D). Вирус также может быть определен в межклеточном пространстве.

Рис.4. Рис.4. Численная плотность особенности Intussusceptive и прорастания сосудов в легких у больных, умерших от Covid-19 или гриппа А(H1N1).

Ангиогенные особенности прорастания и intussusceptive ангиогенеза (intussusceptive столбы и ростки, соответственно) были подсчитаны в поле зрения в микрососудистой коррозии отливок из легких у пациентов с Covid-19 (красный), легкие от больных гриппом А(H1N1) (синий), и контроль легких (белый). В панелях A и B числовой плотности ангиогенные характеристики складываются как коробки участки для intussusceptive и прорастания ангиогенеза. Коробки отражать межквартильный размах, и усы указать диапазон (до 1,5 межквартильного диапазона). Останцы обозначаются особые точки. Статистическое сравнение между легких у пациентов Covid-19, а от больных гриппом и неинфицированного контрольного легких показали значительно более высокую частоту ангиогенеза у пациентов с Covid-19 легких, особенно intussusceptive ангиогенеза (Р-значения были рассчитаны с T Стьюдента-тест, управляет всей семьей погрешность скорости с Benjamini–Хохберга ложное открытие которой порог 0.05). Панели C и D показывают хронологическое сопоставление intussusceptive и прорастания сосудов в легких у пациентов с Covid-19 и легких у больных гриппом А(H1N1) графически изображается как функция длительности госпитализации. Числовые значения коэффициентов корреляции Пирсона и P-значений (все значения Р 0,05 или ниже, также передать ложное открытие порог ставке 0,05). Медиана ангиогенных количество объектов для каждого пациента отображается как одна точка. Заштрихованные охватывая пунктирной линейной регрессии линии сглаживаются 95% доверительные интервалы. В качестве эталона для расширения кровеносных сосудов, формирование в легких заболеваниях, intussusceptive и прорастания ангиогенез как найти в терминальной стадии неспецифическая интерстициальная пневмония (НСИП), хронические интерстициальные заболевания легких, при легких трансплантация (среднее 1650 дней от первичной консультации до легких трансплантация) показаны (фиолетовый ящичковые диаграммы). Находки в здоровых легких также указано (белая коробка участков). Белый и фиолетовый ящичковые диаграммы отображаются по отношению к оси Y, но не x оси (как показано вертикальными пунктирными линиями).

В легких у пациентов с Covid-19, плотность intussusceptive ангиогенные характеристики (среднее [±ГП], 60.7±11.8 особенности в области) была достоверно выше, чем в легких от больных гриппом (22.5±6.9) или в неинфицированного контрольного легких (2.1±0.6) (P<0,001 для обоих сравнений) (рис. 4А). Плотность особенности обычных проращивание ангиогенез был также выше в Covid-19 группе, чем в группе гриппа (рис. 4Б). При легочной ангиогенных функцию счетчика, нанесены в зависимости от продолжительности пребывания в стационаре, степень intussusceptive ангиогенез был найден значительно возрастают с увеличением длительности госпитализации (Р<0,001) (рис. 4С). В отличие от легких от пациентов с гриппом, было меньше intussusceptive ангиогенез и не увеличивается с течением времени (рис. 4С). Аналогичная картина наблюдалась для проращивания ангиогенеза (рис. 4Д).

Рис. 5. Рис. 5. В относительном выражении анализ ангиогенеза-ассоциированных генов в легкие у больных, умерших от Covid-19 или гриппа А(H1N1).

РНК выделяли из отобранных участков, непосредственно прилегающих к тем, которые используются для дополнительных гистологических и иммуногистохимических анализов. РНК выделяли с системой экстракции РНК Максвелл (Promega) и, после контроля качества через кубит анализ (русский), был использован для дальнейшего анализа. Во время процедуры NanoString, отдельные копии всех молекул РНК метили с помощью ген-специфических штрих-кодов и просчитывается индивидуально. с системой анализа nCounter (технологии NanoString). Выражение ангиогенеза-ассоциированных генов измеряли с группой nCounter NanoString прогрессии PanCancer (323 целевых генов, аннотированных как актуальные для ангиогенеза). В результате экспрессии генов данные были нормированы для отрицательного контроля линий (среднее арифметическое вычитание фона), положительный контроль полосы движения (геометрическое коэффициент нормализации), и все референсных генов на панели (геометрическое коэффициент нормализации) с использованием nSolver анализ программного обеспечения, версии 4.0. Показано на диаграмме Венна только гены, которые являются статистически дифференциально экспрессирующихся по сравнению с экспрессией в контрольной в обеих группах заболевание (t-критерий Стьюдента, контролируемой скорости ошибка всей семьей с Benjamini–Хохберга ложное открытие которой порог 0.05). Регуляцию и регуляцию генов обозначаются цветными наконечниками, заканчивающимися на ген символы (фиолетовый цвет обозначает регуляции, красный обозначает вниз-регулирование).

Мультиплексированное анализ ангиогенеза, связанных с экспрессии генов исследовав 323 генов из группы nCounter прогрессирование PanCancer (технологии NanoString) выявлены различия между образцами от пациентов с Covid-19, а от больных гриппом. В общей сложности 69 ангиогенез-связанных генов дифференциально регулируется только в Covid-19 группа, по сравнению с 26 генов, дифференциально регулируется только в гриппа группы; 45 генов, общей экспрессии (Рис. 5).

По материалам сайта nejm.org
По материалам сайта nejm.org

The New England Journal of Medicine - издаваемый на английском языке медицинский рецензируемый научный журнал. Издатель - медицинское общество Массачусетса, США. Это старейший периодический медицинский журнал в мире, и наиболее широко читаемое, цитируемое и влиятельное периодическое издание по общей медицине в мире.

Оставить комментарий

Ваш адрес электронной почты не будет опубликован. Обязательные для заполнения поля отмечены *